超微量分光光度計(jì)常用于核酸純度分析、蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量，蛋白質(zhì)重復(fù)性不好是我們遇到的最多的問題，我們從超微量分光光度的測樣原理來分析一下這個(gè)問題。
一般來說，在進(jìn)行超微量分析時(shí)，需要用移液槍將1-2 μL的蛋白質(zhì)樣品加到樣品臺上，利用蛋白質(zhì)的表面張力，采用樣品拉伸原理，使樣品形成液柱，從未進(jìn)行檢測，殊不知這個(gè)過程就是影響蛋白質(zhì)測定準(zhǔn)確性和重復(fù)性不好的關(guān)鍵因素，幾乎可以影響蛋白質(zhì)表面張力的因素都可導(dǎo)致其測試結(jié)果的不穩(wěn)定。現(xiàn)將這些因素總結(jié)如下：
圖1 元析B-600超微量分光光度計(jì)主機(jī) 圖2 B-600超微量分光光度計(jì)蛋白質(zhì)測量方法界面
1、溫度導(dǎo)致樣品揮發(fā)
首先，液體的溫度與分子間引力有一定的關(guān)系。溫度升高，分子間引力將減弱，表面張力也會隨之降低。這也解釋了為何低溫保存的核酸樣品，更易形成液柱。所以，要得到理想的測試效果，首先要確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的溫度和濕度，要預(yù)防儀器本身的發(fā)熱對樣品的影響。然而，一款擁有封閉式點(diǎn)樣臺的超微量分光光度計(jì)可避免這一問題。
2、鹽
無機(jī)鹽作為一種非表面活性劑，具有水合作用，趨向于把水分子拖入水中,因此會增大表面張力，反之亦然。因此，脫鹽或低鹽的樣品，表面張力會降低，常見于蛋白純化的流程。例如在進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析或質(zhì)譜分析時(shí)，樣品需經(jīng)過脫鹽處理，這樣的樣品在進(jìn)行濃度測量時(shí)，并不容易形成液柱。
3、表面活性劑
蛋白提取過程中經(jīng)常使用的表面活性劑（清潔劑），如SDS、Triton X100，會大幅降低樣品的表面張力，這些物質(zhì)常會殘留在樣本中，難以完全去除。尤其一些非離子型表面活性劑對蛋白質(zhì)在界面吸附性的影響更加值得考慮。
4、固液接觸表面
當(dāng)使用移液器將微量樣品加載到點(diǎn)樣臺后，會出現(xiàn)液體與固體的接觸表面，點(diǎn)樣臺表面的親水/疏水性質(zhì)會影響液體的表面張力。因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度計(jì)，點(diǎn)樣臺表面具有疏水性涂層，會增大液體的張力。
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